肺組織濕/干質(zhì)量比(W/D)測定：再灌注4 h后，取左肺組織用天平進(jìn)行稱質(zhì)量，記錄數(shù)值，然后放于80℃烘箱中 24 h，取出肺組織再稱質(zhì)量，兩者前后比值即為肺組織濕/ 干質(zhì)量比。
肺泡損傷指數(shù)的計算：采用Murata等[23]報道的方法， 取適量肺組織，放入體積分?jǐn)?shù)為10%甲醛標(biāo)本固定液中24 h，常規(guī)制備石蠟切片及經(jīng)過蘇木精-伊紅染色后，在200倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察，連續(xù)計數(shù)10個視野下的肺泡總數(shù)并尋找損傷的肺泡(肺泡內(nèi)出現(xiàn)紅細(xì)胞或/和白細(xì)胞數(shù)>2稱為肺泡損傷)。計算損傷肺泡數(shù)/肺泡總數(shù)×100%， 即肺泡損傷指數(shù)，作為衡量和評價肺組織損傷輕重的指標(biāo)。
血管壁水腫程度及支氣管肺泡灌洗液(BALF)中性粒細(xì)胞、**細(xì)胞數(shù)目的測定：觀察肺部血管及周圍組織腫脹情況，分別測量血管腔的內(nèi)外徑，兩者的比值用來反映血管壁水腫程度。支氣管肺泡灌洗：犬肺缺血再灌注4 h后，在頸部氣管下段作一T形切口，緩慢插入灌洗管，當(dāng)遇到輕微阻力時，表明插管已達(dá)氣管隆突部位，輕輕向左x轉(zhuǎn)插管，稍用力即可進(jìn)入左主支氣管，再次遇到阻力時停止插
管，切口處與灌洗管結(jié)扎固定，從灌洗管中給予生理鹽水溶液緩慢注入。灌洗完畢后，用注射器回抽灌洗液，回抽時應(yīng)緩慢，避免過度用力導(dǎo)致人為損傷氣道。重復(fù)灌洗、回收液體3次后，將灌洗液標(biāo)本離心(轉(zhuǎn)速：1 500 r/min)。 10 min后，從離心機(jī)中取出標(biāo)本，去除上清液，留取細(xì)胞
沉淀物進(jìn)行涂片、蘇木精-伊紅染色，放于顯微鏡下觀察并計數(shù)中性粒細(xì)胞、**細(xì)胞數(shù)目。
主要觀察指標(biāo)：肺組織及血液白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α、內(nèi)皮素1水平；肺組織濕/干質(zhì)量比、肺泡損傷指數(shù)、支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞及**細(xì)胞數(shù)目、肺動脈壓。
統(tǒng)計學(xué)分析：運(yùn)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，所有實驗數(shù)據(jù)采用x_ ±s表示。兩組間計量資料比較，先行正態(tài)性檢驗，判斷是否服從正態(tài)分布(不服從則行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行判斷)，資料服從正態(tài)分布后，行方差齊性檢驗 (Levene’s Test)。若方差齊，采用兩獨立樣本t 檢驗；若方 差不齊，采用t' 檢驗。兩組間不同時間段監(jiān)測主肺動脈壓、左肺動脈壓、右肺動脈壓屬于重復(fù)測量資料，兩組間進(jìn)行比較，采用單因素方差分析(ANOVA)。設(shè)定檢驗水準(zhǔn) α=0.05，即P< 0.05時認(rèn)為差異有顯著性意義。
2結(jié)果 Results 2.1 肺組織及血液中白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α、內(nèi) 皮素1水平分析
實驗組(低鉀右旋糖苷+去氫駱駝蓬堿保 護(hù)液灌洗組)與對照組(低鉀右旋糖苷保護(hù)液灌洗組)中肺組織及血液的白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α、內(nèi)皮素1水平 進(jìn)行比較，經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊(0.05)，采用兩樣 本t 檢驗。經(jīng)分析，兩組白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α、 內(nèi)皮素1水平差異均無顯著性意義(P> 0.05，表1)。從實際 測得數(shù)據(jù)均值來看，再灌注2 h時，實驗組中左肺組織及血 液的白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α及血液中的內(nèi)皮素1水平較對照組有所降低，說明肺損傷程度較對照組有所減輕；再灌注4 h時，實驗組中左肺組織及血液的白細(xì)胞介素17、腫瘤壞死因子α、內(nèi)皮素1水平較對照組有所升高，說明肺損傷程度較對照組有所加重。2.2 再灌注4 h后肺組織內(nèi)病理指標(biāo)分析實驗組與對照組中再灌注4 h的肺泡損傷指數(shù)、血管壁水腫程度、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中性粒細(xì)胞及**細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行比較。經(jīng)方差齊性檢驗，兩組肺泡損傷指數(shù)進(jìn)行比較方差不齊(P =0.013)，采用t' 檢驗，其余采用兩樣本t 檢驗。經(jīng)分析，兩組中的肺泡損傷指數(shù)、血管壁水腫程度、支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞及**細(xì)胞數(shù)目差異均無顯著性意義(P > 0.05，表2)。從實際測得數(shù)據(jù)均值來看，實驗組中的肺泡損傷指數(shù)、灌洗液中性粒細(xì)胞數(shù)目較對照組有所降低，說明肺損傷程度有所減輕；而血管壁水腫程度、灌洗液**細(xì)胞數(shù)目較對照組有所升高，說明肺損傷程度有所加重。
2.3 再灌注4 h后左肺濕/干質(zhì)量比分析實驗組與對照組再灌注4 h后的左肺組織濕/干質(zhì)量比分別為6.092± 1.870和5.695±0.174，經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊(P > 0.05)，采用兩樣本t 檢驗。經(jīng)分析，兩組肺濕/干質(zhì)量比差異無顯著性意義(t=0.518，P > 0.05)。從實際測得數(shù)據(jù)均值來看，實驗組肺濕/干質(zhì)量比較對照組有所升高，說明實驗組肺水腫程度較對照組有所加重(圖1)。
2.4 肺動脈壓力分析采用單因素方差分析，兩組的主肺動脈壓、左肺動脈壓及右肺動脈壓差異均無顯著性意義(P > 0.05，表3)。從圖2，3可以看出，實驗組的左肺動脈壓均值在開放循環(huán)和開放后30 min*高，隨后出現(xiàn)下降，在開放后150 min出現(xiàn)回升，之后緩慢下降后維持在26 mm Hg左右；對照組左肺動脈壓均值在開放循環(huán)后出現(xiàn)緩慢上升，在開放后120 min達(dá)到峰值，隨后出現(xiàn)緩慢下降后維持在30 mm Hg左右。從實際測得的數(shù)據(jù)均值來看，實驗組的主肺動脈壓、左肺動脈壓及右肺動脈壓均值低于對照組，說明實驗組肺循環(huán)阻力較對照組有所降低，肺血管收縮程度較對照組有所減輕，機(jī)制可能與血管舒張因子的生成、釋放有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究證實。單從本實驗肺動脈壓力進(jìn)行分析，實驗組的肺保護(hù)程度比對照組好。
