抓力-加味滌痰湯灌胃對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響

劉曉婷1，2 ，陳維達(dá)3 ，陳澤濤3 ，王海濤2

( 1 山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250014; 2 濰坊市中醫(yī)院; 3 山東省中醫(yī)院)

摘要: 目的     探討加味滌痰湯灌胃對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響。方法選取 SPF 級(jí)雄性 SD大鼠 90 只，分為假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組 5  組，每組大鼠 16  只。采用可逆性大鼠腦中動(dòng)脈閉塞線栓法進(jìn)行右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞( MCAO) ，于造模成功后 24 h 假手術(shù)組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高劑量組、中藥低劑量組分別灌胃加味滌痰湯 1． 92、0． 96  g / ( kg·d) ，西藥組灌胃吡拉西坦片 0． 5  g / ( kg·d) ，灌胃容積為 10  mL / kg; 1 次/ d，連續(xù)給藥 7  d。各組于**開始前及**結(jié)束 24  h 內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試并記錄，于給藥周期結(jié)束 24 h 內(nèi)，取腦組織切片、染色、拍照，計(jì)算各組梗死體積比及缺血側(cè)大腦水腫度。結(jié)果 **后神經(jīng)障礙評(píng)分及平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分中藥高劑量組、西藥組與模型組比較明顯減低( P 均 ＜0． 05) ，中藥低劑量組*為顯著 ( P ＜ 0． 01) ; 中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組較模型組自發(fā)活動(dòng)次數(shù)明顯增多( P 均 ＜ 0． 05) ，中藥高劑量組*為顯著( P ＜ 0． 01) ，中藥低劑量組及西藥組亦明顯增多( P  均 ＜0． 05 ) ，中藥高、低劑量組與西藥組比較，P  均 ＜0． 05; 中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組與模型組腦梗死體積相比均明顯降低( P 均 ＜ 0． 01) ; 中藥低劑量組、西藥組缺血側(cè)大腦水腫度明顯降低( P 均 ＜ 0． 01) 。結(jié)論     加味滌痰湯灌胃對(duì)缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能有保護(hù)作用，能提高受累肢體肌力、恢復(fù)精巧運(yùn)動(dòng)，減少腦梗死體積。

關(guān)鍵詞: 腦缺血再灌注損傷; 加味滌痰湯; 中藥; 神經(jīng)保護(hù); 大鼠

doi: 10． 3969 / j． issn． 1002-266X． 2016． 41． 010

中圖分類號(hào): Ｒ651． 1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào): 1002-266X( 2016) 41-0036-03

缺血性腦卒中是腦血管病中*常見的一種類型，約占全部腦血管病的 80% 。腦缺血一定時(shí)間恢復(fù)血液供應(yīng)后，其功能不但未能恢復(fù)，卻出現(xiàn)了更加 嚴(yán)重的腦功能障礙，稱為腦缺血再灌注( CIＲ) 損傷［1］。缺血再灌注損傷是缺血性腦卒中導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙的主要病理基礎(chǔ)，缺血性腦卒中屬于中醫(yī) “中風(fēng)”范疇，出自《濟(jì)生方》的滌痰湯有滌痰開竅之功，是**急性期缺血性腦卒中的有效方劑。2015 年 1 月 ～ 2016 年 1 月，我們探討了加味滌痰湯灌胃對(duì) CIＲ 損傷大鼠神經(jīng)功能的影響。

1 材料與方法

1． 1 材料 雄性 SD  大鼠 90  只，SPF  級(jí)，體質(zhì)量140 ～ 160  g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK( 京)2012-0001，質(zhì)量合格證號(hào) NO． 011400700055671。2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司; 蘇木色精、曙紅  Y、甲苯胺藍(lán)等試劑均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)儀器系統(tǒng)冠狀切腦， 型號(hào) 68709，深圳瑞沃德公司; LEICA  ＲM2245  切片機(jī)，LEICA  HI1220  烤片機(jī)，LEICA  XL  全自動(dòng)染色機(jī)，OLYMPUS  BX51  生物顯微鏡; FED53  恒溫干燥箱購自德國 Binder 公司; LEICA ASP200s 全自動(dòng)全封閉脫水機(jī)，LEICAEG1150H 包埋機(jī); 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購自上海培因公司; 自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)和大小鼠抓力測(cè)定儀，購自北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司。中藥加味滌痰湯( 膽南星 12 g、石菖蒲、橘紅、梔子、枳實(shí)各 10  g，半夏 9  g，水蛭、生大黃各 6 g) ，采用北京康仁堂藥業(yè)全成分中藥配方顆粒，每劑 9． 6  g。西藥吡拉西坦片( 0． 4  g / 片) 購自山東仁和堂藥業(yè)有限公司。

1． 2    CIＲ 損傷模型建立與分組    以 10% 水合氯醛

按 3． 5  mL / kg 麻醉大鼠，按照 Clark  等［2］的方法，采用可逆性大鼠腦中動(dòng)脈閉塞線栓法進(jìn)行右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞( MCAO) 手術(shù)，縫合皮膚切口并**。假手術(shù)組除不插入線栓外過程相同。缺血 90 min 后拔出栓線進(jìn)行再灌注［3］，再灌注 90  min 時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分，參照 Longa 等［4］ 制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，神經(jīng)功能評(píng)分為1 ～ 3 分的MCAO 大鼠和0 分的假手術(shù)大鼠為本實(shí)驗(yàn)選用。實(shí)驗(yàn)共分為 5 組: 假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組，假手術(shù)組選用 0 分的假手術(shù)大鼠 16 只，其余 4 組隨機(jī)選取造模成功大鼠各 16 只; 假手術(shù)組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高、低劑量組分別灌胃加味滌痰湯 1． 92、0． 96  g / ( kg·d) ，西藥組灌胃吡拉西坦片 0． 5  g / ( kg·d) ，灌胃容積為 10  mL / kg; 于造模成功后24 h 給藥，1 次/ d，連續(xù)給藥7 d，固體飼料和水自由攝取。

1． 3    神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試    各組于**開始前及**結(jié)束 24 h 內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試并記錄。①神經(jīng)功能障礙評(píng)分: 參照 Longa 等［4］ 制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。②平衡木行走實(shí)驗(yàn)［5］: 測(cè)定大鼠運(yùn)動(dòng)整合及協(xié)調(diào)能力，術(shù)前 1 周每天早晚各訓(xùn)練 1 次，每次 10 min，使其能順利在平橫木上行走。平衡木長 80 cm、寬 2． 5  cm，平放在距離地面高 10  cm 處，參考 Feeney 的計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)。③自發(fā)活動(dòng)次數(shù)和抓力: 將每只大鼠單獨(dú)置于暗室之中，采用自發(fā)活動(dòng)視頻分析 系統(tǒng)記錄 10  min 中內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)次數(shù)，并用抓力測(cè)定儀對(duì)大鼠逐一進(jìn)行抓力測(cè)試。術(shù)前 1 周每天早晚各訓(xùn)練 1 次，使大鼠適應(yīng)暗室及對(duì)抓力板抓握。④ 腦梗死體積比和缺血側(cè)大腦水腫度: 各組給藥周期結(jié)束 24  h 內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試后將大鼠斷頭取腦，取用的腦組織置于冰浴中迅速切片，切片厚度 3 mm，37  ℃ 避光 TTC 染色約 30  min，取出腦片，拍照，用 Image-Pro Plus 6． 0 軟件處理圖片，計(jì)算各組梗死體積比 同時(shí)計(jì)算缺血側(cè)大腦水腫度 。

1． 4    統(tǒng)計(jì)學(xué)方法    采用 SPSS17． 0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以 x珋± s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用 LSD 法。P ＜0． 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2． 1 各組**前后神經(jīng)功能障礙評(píng)分、平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分比較 見表 1。

2． 2 各組**前后自發(fā)活動(dòng)次數(shù)和抓力測(cè)量結(jié)果比較  見表 2。

2． 3 各組**后腦梗死體積比和缺血側(cè)大腦水腫度比較 見表 3。