施灸赫依三穴對(duì)**模型大鼠行為學(xué)及腦組織ＩＬ－ ６含量的影響

乎寶力格１，高玉峰１＊ ，蘇日古嘎２

 （１ ．內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古  通遼０２８００７；２．內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古  通遼０２８０００）

摘    要：目的：觀察施灸赫依三穴對(duì)**模型大鼠行為學(xué)及腦干組織中ＩＬ－６ 含量的影響。方法：將６０只正常雄性ＳＤ 大鼠按體重隨機(jī)分為６ 組，分別為正常組、模型組、安定組、頂會(huì)穴組、赫依穴組和黑白際穴組，每組各１０只。除正常組外，其余５ 組腹腔注射 ＰＣＰＡ 混懸液（１ｍＬ／１００ｇ），連續(xù)注射２ 天制造大鼠**模型。成功造模后進(jìn)行干預(yù)：正常組常規(guī)喂養(yǎng)；模型組每天抓取固定１次，常規(guī)喂養(yǎng)；安定組灌胃安定（***）注射液（０．９２ｍｇ／ｋｇ），每日１次，連續(xù)灌胃７天；頂會(huì)穴組、赫依穴組和黑白際穴組分別施灸相應(yīng)的穴位，每日施灸１次，每次５ｍｉｎ，連續(xù)７天。通過(guò)轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)和定位航行實(shí)驗(yàn)觀察比較各組大鼠棒上停留時(shí)間和找到平臺(tái)的時(shí)間，并采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測(cè)大鼠腦干ＩＬ－６ 的含量。結(jié)果：轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)：模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時(shí)間縮短，與正常組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會(huì)穴組、黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持的時(shí)間顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

（Ｐ＜０．０５）；定位航行實(shí)驗(yàn)：模型組大鼠找到站臺(tái)的時(shí)間延長(zhǎng)，與正常組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜ ０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會(huì)穴組、黑白際穴組大鼠找到站臺(tái)的時(shí)間顯著縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；模型組大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量顯著高于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜ ０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會(huì)穴組、黑白際穴組大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：蒙醫(yī)施灸赫依三穴可降低**大鼠腦干中ＩＬ－６含量，從而使大腦興奮性降低，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)**大鼠腦干中ＩＬ－６含量相關(guān)。

關(guān)鍵詞：**；蒙醫(yī)灸療；行為學(xué)；白細(xì)胞介素－６

隨著社會(huì)的發(fā)展、生活節(jié)奏的加快，**成為流行病之 一，其嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量，可誘發(fā)諸多**。蒙醫(yī)理論  認(rèn)為**的病因分為外因和內(nèi)因，外因系勞逸失調(diào)、思慮太 過(guò)、驚嚇、失血等，內(nèi)因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈，大多屬“赫依病”范疇。前期研究［１－２］已表明，施灸赫依三穴對(duì)**模型大鼠有**作用，可降低**神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)———ＮＯ 與 ＮＯＳ的活性。白細(xì)胞介素－６（ＩＬ－６）是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，參與睡眠－ 覺(jué)醒過(guò)程，具有調(diào)控睡眠的作用［３］。筆者在前期研究的基礎(chǔ)上觀察施灸赫依三穴對(duì)**大鼠行為學(xué)變化及腦干內(nèi)ＩＬ－６ 含量的影響，進(jìn)一步探討其****的作用機(jī)制。

１ 材料與試藥

１．１   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇健康雄性 ＳＤ 大鼠６０ 只，體重約（２００± １０）ｇ，全部大鼠均由沈陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 提供，合 格證號(hào)：

（ＳＸＳＫ（遼）２０１５－０００１）。

１．２   試劑與儀器

ＺＢ－２００疲勞轉(zhuǎn)棒儀（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）；ＡＵＷ１２０Ｄ 型島津電子天平（日本島津）；定位航行試驗(yàn)水槽（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）；Ｂｉｏｔｅｋ Ｅｌｘ８００酶標(biāo)儀（美國(guó)Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）；對(duì)氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）（  北京環(huán)亞太克生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；艾灸貼（蘇州東方艾絨廠）；ＩＬ－６酶聯(lián)**分析（ＥＬＩＳＡ）試劑盒（廣州瑞博奧生物科技有限公司）。

２ 方 法

２．１   造模方法

本實(shí)驗(yàn)采用公認(rèn)的對(duì)氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）造模法制備**大鼠模型［４］。將 ＰＣＰＡ 用生理鹽水配制成混懸液（ ４５ｍｇ／１００ｇ），除正常組外，其余組大鼠腹腔注射 ＰＣＰＡ 混懸液（１ｍｇ／１００ｇ），每天１次，連續(xù)注射２天。大鼠出現(xiàn)活動(dòng)明顯頻繁，對(duì)外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節(jié)律消失等，表明造模成功。

２．２   分組及處理方法

將６０只ＳＤ 雄性大鼠隨機(jī)分為６ 組，即正常組、模型組、安定組、頂會(huì)穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組１０只。正常組：大鼠腹腔注射19%氯化鈉溶液（１ｍＬ/ １００ｇ）

每日１次，連續(xù)注射２日；與**組相同的抓取、固定，不做任何**，連續(xù)７天。

模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。安定組：造 模成功 后，采 用 安 定 （地 西 泮 ）注 射 液，０．９２ｍｇ／ｋｇ，每日１次，連續(xù)灌胃７天。頂會(huì)穴組：造模成功后施灸大鼠頂會(huì)穴，每日１ 次，連續(xù)７天。赫依穴組：造模成功后施灸大鼠赫依穴，每日１ 次，連續(xù)７天。黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠黑白際穴，每日 １ 次，連續(xù)７天。

２．３   觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

２．３．１轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)［５］ 實(shí)驗(yàn)裝置為單頭固定的水平棒。先將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)整到訓(xùn)練狀態(tài)，使各組大鼠適應(yīng)，再將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)到２０ｒ／ｍｉｎ，當(dāng)直棒轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，將大鼠放在轉(zhuǎn)棒上，記錄大鼠在轉(zhuǎn)棒上持續(xù)不落降的時(shí)間，每只大鼠重復(fù)測(cè)定３次，取平均值。

２．３．２  定位航行實(shí)驗(yàn)［６］ 實(shí)驗(yàn)時(shí)向水箱里加入自來(lái)水和適量牛奶，使液體與水箱顏色一致，水平面高于站臺(tái)２ｃｍ，水溫控制在（２４±２）℃。實(shí)驗(yàn)前將各組大鼠放入水箱內(nèi)自由游泳，若１２０ｓ未找到站臺(tái)，人為將其移至到站臺(tái)上，使大鼠熟悉水箱內(nèi)環(huán)境。測(cè)試時(shí)將大鼠沿水箱壁輕巧放入水池，記錄大鼠找到站臺(tái)的時(shí)間，若大鼠放入水中１２０ｓ內(nèi)未找到站臺(tái)，以１２０ｓ計(jì)。

２．３．３  大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量測(cè)定［７］ 將６ 組大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱(chēng)重，－８０℃ 冰箱保存待測(cè)。取１００ｍｇ組織加入５００μＬ 裂解液，冰上裂解３０ｍｉｎ，每５ｍｉｎ振蕩１次，在冰上用高速分散切割機(jī)進(jìn)行組織破碎，冷凍離心機(jī)離心，１３０００ｒｐｍ，２０ｍｉｎ，取上清液。采用 ＥＬＩＳＡ 法，按照ＩＬ－６試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟，在酶標(biāo)儀上的５４０～５９５ｎｍ波長(zhǎng)范圍內(nèi)檢測(cè)吸光度，其中５６２ｎｍ 波長(zhǎng)為*佳測(cè)量光密度值，計(jì)算出ＩＬ－６含量。

２．４   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)錄入ＳＰＳＳ１７０統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，連續(xù)性計(jì)量資料以平方差（珚 ）表示，數(shù)據(jù)比較使用獨(dú)立樣本 檢驗(yàn)。等級(jí)數(shù)據(jù)資料以百分比（％）表示，數(shù)據(jù)間比較采用卡方檢驗(yàn)。Ｐ＜０．０５為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

３ 結(jié) 果

３．１   各組大鼠轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

與正常組相比，模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時(shí)間縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會(huì)穴組和黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時(shí)間延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見(jiàn)表１。